La infertilidad puede ser definida como la incapacidad para concebir después de un año de relaciones sexuales sin métodos anticonceptivos. Este problema afecta al 10- 15% de las parejas a nivel mundial. Las microdeleciones del cromosoma Y (MCY) constituyen la segunda causa genética más frecuente de infertilidad masculina. MCY se producen en el locus Factor de azoospermia (AZF) en la banda q11.23. AZF se subdivide en tres regiones: AZFa, AZFb y AZFc.La Academia Europea de Andrología (EAA) y la Red Europea de Calidad de Genética Molecular (EMQN), recomiendan a la PCR como prueba gold estándar para detectar MCY. Sin embargo, la PCR evidencia deleciones sólo en una porción específica del cromosoma Y, limitandose la detección de otras variaciones de número de copias (CNVs) patogénicas. En la literatura, varios trabajos asocian estos CNVs con duplicaciones en el cromosoma Y, que llevan a fallas en la espermatogénesis. Los hallazgos inconsistentes sobre los efectos clínicos de las deleciones y duplicaciones parciales de AZF demuestran la necesidad de ampliar la investigación y de desarrollar técnicas que evalúen mejor estas variaciones genómicas.Se han estudiado en nuestro laboratorio, pacientes infértiles, azoospérmicos y/u oligozoospérmicos severos, donde no se han detectado deleciones o anomalías en el locus AZF con la prueba PCR. La empresa MRC Holland, propone la técnica de amplificación de sondas dependiente de ligación en multiplex (MLPA) para detectar deleciones y duplicaciones en el locus AZF. La puesta en marcha de esta técnica, otorga nuevas herramientas a especialistas para esclarecer la causa de la infertilidad. El objetivo de este trabajo es desarrollar el ensayo de MLPA para el diagnóstico de deleciones y duplicaciones del cromosoma Y, en el diagnóstico de infertilidad masculina.Se tomarán muestras de sangre de pacientes masculinos, con diagnóstico de infertilidad y/o azoospermia no obstructiva u oligozoospermia severa (espermatozoides en semen ≤, 15 millones/ml), derivados por especialistas. Se extraerá ADN utilizando la práctica Salting Out y, por las técnicas PCR multiplex y MLPA, se amplificará el locus AZF. Los productos obtenidos se evidenciarán en el Secuenciador Automático ABI3130.A partir de los resultados y experiencia obtenida, se pretende poner en marcha la técnica MLPA que complemente el diagnóstico de MCY y/o duplicaciones en aquellos pacientes donde no pudo ser detectado por la prueba PCR.

Palabra claves: Infertilidad, Microdeleciones, MLPA

Infertility can be defined as the inability to conceive after one year of intercourse without contraception. This problem affects 10-15% of couples in the world. Y chromosome microdeletions (MCY) are the second most common genetic cause of male infertility. MCY are produced at the azoospermia factor (AZF) locus in band q11.23. AZF is divided into three regions: AZFa, AZFb, and AZFc.The European Academy of Andrology (EAA) and the European Molecular Genetics Quality Network (EMQN) recommend PCR as the gold standard test to detect MCY. However, PCR shows deletions only in a specific Y chromosome portion, limiting the detection of other pathogenic copy number variations (CNVs). In the literature, several works associate these CNVs with duplications in Y chromosome, which lead to failures in spermatogenesis. Inconsistent findings on clinical effects of AZF partial deletions and duplications demonstrate need more research and development of techniques that better assess these genomic variations.Infertile, azoospermic and severe oligozoospermic patients have been studied in our laboratory, where no deletions or abnormalities in the AZF locus have been detected with PCR test. MRC Holland company proposes multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) technique to detect deletions and duplications in AZF locus. The implementation of this technique provides new tools to specialists to clarify infertility cause. The aim of the research is to develop the MLPA assay for the diagnosis of Y chromosome deletions and duplications in male infertility diagnostic.Blood samples will be taken from male patients diagnosed with infertility, non-obstructive azoospermia or severe oligozoospermia (sperm in semen ≤, 15 million/ml), referred by specialists. DNA will be extracted using the Salting Out practice and, AZF locus will be amplified by multiplex PCR and MLPA techniques. Products will be evidenced in Automatic Sequencer ABI3130.Based on the results and experience obtained, it is intended to implement the MLPA technique that complements MCY and duplications diagnostic in patients where it could not be detected by PCR test.

Keywords: Infertility, Microdeletions, MLPA

Las pacientes con expresión del receptor para el factor de crecimiento epidérmico tipo 2 (HER2) presentan una peor evolución. Existen evidencias que sugieren vínculos entre HER2 y la señalización de B-catenina. Sin embargo, no existen resultados de otros grupos que describan una relación entre la distribución/localización de B-catenina y HER2 en función de la progresión tumoral ni de las moléculas que regulan su localización subcelular. Previamente, reportamos una correlación entre la localización de B-catenina en la membrana celular y la distribución de HER2 asociada a buen pronóstico en mujeres con cáncer de mama no tratadas con trastuzumab. El estado de fosforilación y desfosforilación de B-catenina mediado por PKD1 y PTP1B respectivamente, podría favorecer la localización en membrana de la proteína en cáncer de mama HER2+ asociado a un pronóstico favorable de la enfermedad. El desarrollo del proyecto revelará los mecanismos reguladores de la expresión génica de PTP1B y PKD1 relacionado al fenotipo tumoral. Los estudios en biopsias de pacientes HER2+ e in silico permitirán dilucidar los mecanismos moleculares que regulan la expresión PTP1B y PKD1 y su impacto sobre la localización de b-catenina en la membrana de las células tumorales HER2+, su relación con el pronóstico de la enfermedad y la respuesta a los tratamientos dirigidos. La metodología incluye estudios inmunohistoquímicos y procesaremos datos ómicos provenientes de las plataformas The Cancer Genome Atlas (TCGA) y de Metabric y los datos de microarrays provenientes de la plataforma Affymetrix SNP 6.0 array. Usaremos el lenguaje de programación R, que permite el análisis de grandes cantidades de datos, facilitando la obtención de resultados de alta calidad y relevancia biológica. Consideramos muy importante el estudio de la correlación entre B-catenina y HER2 localizados en membrana para conocer los mecanismos moleculares que favorecen este perfil. De esta manera, las pacientes con B-catenina en membrana podrían evitar la terapia anti-HER2 capaz de generarles resistencia y gastos económicos innecesarios.

Palabra claves: CANCER, HER2, B-catenina

Patients with receptor for epidermal growth factor type 2 (HER2) expression show a worse outcome. There is evidence to suggest links between HER2 and B-catenin signaling. However, there are no results from other groups describing a relationship between the distribution/localization of B-catenin and HER2 in function of tumor progression and the molecules that regulate its subcellular localization. Previously, we reported a correlation between the localization of B-catenin in the cell membrane and the distribution of HER2 associated with good prognosis in women with breast cancer not treated with trastuzumab. The phosphorylation/dephosphorylation states of B-catenin mediated by PKD1 and PTP1B, respectively, could support the membrane localization of the protein in HER2+ breast cancer associated with a favorable prognosis of the disease. The project will reveal the regulatory mechanisms of the gene expression of PTP1B and PKD1 related to the tumor phenotype. The studies in HER2+ patient?s biopsies and in silico will allow to elucidate the molecular mechanisms that regulate PTP1B and PKD1 expression and their impact on the localization of B-catenin in the membrane of HER2+ tumor cells, their relationship with the prognosis of the illness. The methodology includes immunohistochemistry studies. We will process omic data from The Cancer Genome Atlas (TCGA) and Metabric platforms and microarray data from the Affymetrix SNP 6.0 array platform. We will use the R programming language, which allows the analysis of large amounts of data, facilitating the achievement of high quality and biologically relevant results. We consider the study of the correlation between B-catenin and HER2 located in the membrane to be very important to know the molecular mechanisms that favor this profile. In this way, patients with membrane B-catenin could avoid anti-HER2 therapy capable of generating resistance and unnecessary economic costs.

Keywords: CANCER, HER2, B-catenin

Chlamydia trachomatis es la bacteria de transmisión sexual más frecuente en el mundo. En la mujer puede provocar cervicitis, obstrucción de las trompas de Falopio, embarazos ectópicos e infertilidad. Chlamydia es una bacteria intracelular obligada que posee un genoma muy reducido y cuya estrategia de multiplicación implica la explotación y la utilización de la maquinaria de la célula que infecta. Este estilo de vida parasitario implica la alteración de los niveles de expresión, distribución y/o función de muchas de las proteínas del hospedador. En este sentido numerosos trabajos han postulado que esta bacteria actúa como un factor de riesgo en el desarrollo de cáncer cervical. La superfamilia de las miosinas, codificadas en 39 genes y agrupadas en 12 clases diferentes, participa en numerosos procesos y se ha visto que en diferentes tipos de cáncer sus niveles de expresión se encuentran alterados. Nuestros resultados indican que C. trachomatis requiere de ciertas miosinas del hospedador. Miosina 1C (Myo1C) y miosina 6 (Myo6) son fundamentales tanto en la invasión como el desarrollo, mientras que la miosina no muscular 2 a (Myo2a) es necesaria para el desarrollo bacteriano. Postulamos que C. trachomatis podría estar afectando los niveles de expresión, distribución y/o función de dichas miosinas para asegurar su desarrollo y esto podría contribuir a la transformación celular. Por otro lado, el tratamiento de las infecciones clamidiales con los antibióticos clásicos ha demostrado ser ineficiente para erradicar la infección persistente. Teniendo en cuenta que las miosinas anteriormente mencionadas son fundamentales para su entrada y desarrollo, consideramos que el tratamiento con inhibidores específicos y reversibles para estas miosinas, como tratamiento complementario para erradicar las infecciones persistentes, podría ser una estrategia eficaz para su eliminación. En este sentido este proyecto permitirá determinar las alteraciones moleculares que provoca C. trachomatis en las miosinas de la célula que infecta y evaluar nuevos fármacos para su tratamiento.

Palabra claves: CHLAMYDIA TRACHOMATIS, MIOSINAS, TRATAMIENTO

C. trachomatis is the most common sexually transmitted bacteria in the world. It can cause cervicitis, obstruction of the fallopian tubes, ectopic pregnancies, and infertility in women. Chlamydia is an obligate intracellular bacterium that has a small genome and whose multiplication strategy involves the exploitation of cell machinery. This parasitic lifestyle involves the alteration in the expression rate, distribution, or function of many host proteins. In this sense, numerous works have postulated that this bacterium acts as a risk factor in the development of cervical cancer. The human myosin superfamily, encoded in 38 genes and grouped into 12 different classes, participates in numerous processes. It has been determined that the expression levels of myosin are altered in different types of cancer. Our results indicate that C. trachomatis requires 5 host myosins. Myosin 1C (Myo1C) and myosin 6 (Myo6) are critical for both invasion and development of Chlamydia. Non-muscle myosin 2a (Myo2a) is required for bacterial growth. We hypothesize that C. trachomatis affects the expression levels, distribution, or function of these myosins to ensure bacterial development, and this could contribute to cell transformation. On the other hand, chlamydial infections treatment with classical antibiotics is inefficient in eradicating persistent infection. Taking into account that myosins are essential for their entry and development, we consider that treatment with specific and reversible inhibitors for these myosins to eradicate persistent infections as a complementary treatment could be an effective strategy for their elimination. In this sense, this project will make it possible to determine the molecular alterations caused by C. trachomatis in the host cell myosins and to evaluate new drugs for its treatment.

Keywords: CHLAMYDIA TRACHOMATIS, MYOSINS, TREATMENT

La respuesta inflamatoria del hospedador a toxina Shiga (STx) y/o al lipopolisacarido (LPS) de E coli está involucrada en la fisiopatologia del Sindrome Uremico Hemolitico (SUH).El receptor Toll-like 4(TLR4),proteina que reconoce al LPS bacteriano,interviene en la respuesta inmune innata inicial. El LPS, en conjunto con CD14 y MD-2,se une en la membrana plasmatica a TLR4 e inicia una señal intracelular que conduce a respuesta inflamatoria. EL trafico desde la superficie celular yla ruta intracelular del complejo LPS/TLR4/MD-2 son esenciales para lograr el control de dicha respuesta.Una vez internalizado, el complejo es direccionado desde endosomas tempranos hacia lisosomas, enviado a endosomas de reciclaje y/oalreticuloTransGolgi.Rab7b,unapequeñaGTPasa, expresada selectivamente en monocitos y localizada en endosomas tardios, participa en la regulacion del trafico de receptores. Las señales generadas por la activacion de TLRs o induccion de estres en el RE, pueden integrarse y conducir al estimulo inflamatorio patologico.Hsp70,chaperona residente de RE,regula vias de señalizacion a traves de su interaccion con otras proteinas. CHIP, cochaperona de Hsp70, es una ubiquitina ligasa E3 que favorece la poliubiquitinacion de otras proteinas para ser degradadas en proteosomas. Estudiaremos la participacion de las vias endocitica y proteosomica sobre la regulacion temprana del complejo LPS/TLR4 y su efecto sobre la respuesta inflamatoria en monocitos estimulados con LPS. Analizaremos el efecto de LPS sobre la expresión de TLR4 en la superficie y en el interior celular, sobre la expresión de Rab7b y la producción y liberación de las citoquinas intracelulares TNFalfa e IL6. Estudiaremos el papel de Hsp70/CHIP en la via proteosomica sobre la regulacion temprana del complejo LPS/TLR4.Por último analizaremos la expresion de Rab7b, Hsp70 y CHIP, y la produccion y liberacion de citoquinas TNFaalfa, e IL6 en monocitos circulantes, obtenidos de ratones knockout TLR4-/- estimulados con LPS a fin de corroborar que Rab7b de la via endocitica y Hsp70/CHIP de la via de degradacion proteosomica estan involucradas en la regulacion de TLR4 y la consecuente respuesta inflamatoria.

Palabra claves: TLR4, HSP70/CHIP, Rab7b

The host inflammatory response to Shiga toxin (STx) and/or Ecoli lipopolysaccharide (LPS) is involved in the pathophysiology of Hemolytic Uremic Syndrome (HUS). Toll-like receptor 4 (TLR4), a protein that recognizes bacterial LPS, is involved in the initial innate immune response. LPS, in conjunction with CD14 and MD-2, binds to TLR4 on the plasma membrane and initiates an intracellular signal that leads to an inflammatory response. Traffic from the cell surface and the intracellular route of the LPS/TLR4/MD-2 complex are essential to achieve control of this response. Once internalized, the complex is routed from early endosomes to lysosomes, sent to recycling endosomes and/or the Trans Golgi reticulum. Rab7b, a small GTPase, selectively expressed on monocytes and localized in late endosomes, is involved in the regulation of receptor trafficking. The signals generated by the activation of TLRs or the induction of stress in the endoplasmic reticulum (ER) can be integrated and lead to the pathological inflammatory stimulus. Hsp70 chaparone, resident from the ER, regulates signaling pathways through its interaction with other proteins. CHIP, cochaperone of Hsp70, is an E3 ubiquitin ligase that favors the polyubiquitination of other proteins to be degraded in proteasomes. Objective: We will study the participation of the endocytic and proteosomal pathways in the early regulation of the LPS/TLR4 complex and its effect on the inflammatory response in LPS-stimulated monocytes. We will analyze the effect of LPS on the expression of TLR4 on the surface and inside the cell, the expression of Rab7b and the production and release of the intracellular cytokines TNFalfa and IL6. We will study the role of Hsp70/CHIP in the proteasomal pathway on the early regulation of the LPS/TLR4 complex. Lastly, we will analyze the expression of Rab7b, Hsp70 and CHIP, and the production and release of cytokines TNFalfa, and IL6 in circulating monocytes, obtained from TLR4-/- knockout mice and stimulated with LPS in order to corroborate that Rab7b of the endocytic pathway and that Hsp70/CHIP of the proteasome degradation pathway are involved in the regulation of TLR4 and the consequent inflammatory response.

Keywords: TLR4, HSP70/CHIP, Rab7b

El botulismo es una enfermedad neuroparalítica de alta letalidad que afecta al hombre y a distintas especies animales, causado por las neurotoxinas botulínicas (NTBo). Estas NTBo son producidas principalmente por Clostridium botulinum, cuyas cepas pueden identificarse por el bioensayo de neutralización serológica, conocido como el método ?Gold Standard? (Poulain et al. 2008). El botulismo del lactante (BL) es una toxiinfección en niños menores de 12 meses de edad y posiblemente letal. Su diagnóstico presenta dificultades por la manifestación de síntomas no específicos y el amplio espectro en la severidad de los mismos. (Koepke y col, 2008). En Argentina es la forma fisiopatogénica de mayor incidencia. La NTBo, al llegar a la placa mioneural, se une irreversiblemente a receptores específicos, inhibiendo la liberación del neurotransmisor, generando una parálisis fláccida, pudiendo ocasionar la muerte. (Schiavo G. y col. 1993). Además, la NTBo es utilizada farmacológicamente en para el tratamiento de múltiples patologías.La fracción de NTBo con actividad tóxica es internalizada y actúa inhibiendo la liberación de acetilcolina por proteólisis de la proteína de fusión SNAP 25, induciendo la parálisis fláccida. La NTBo/A se usa actualmente para más de 20 tratamientos médicos diferentes (Dressler, 2012).Actualmente se conocen varios métodos para evaluar la actividad tóxica, para los fines diagnósticos o terapéuticos. El bioensayo en ratones ofrece una alta eficacia, sensibilidad y permite detectar toxina funcionalmente activa en concentraciones por debajo de los 10 pg/mL, en contraste con otros métodos inmunológicos. Sin embargo posee algunas desventajas relacionadas al costo, cuestiones éticas de la investigación con animales vivos y la cantidad de tiempo para realizar el ensayo. Por ello nos planteamos métodos alternativos para evaluar la actividad proteolítica de la toxina. En el presente proyecto plantea un ensayo in vitro que podría reemplazar a futuro el bioensayo con animales. Este se basa en evaluar la actividad de la toxina (NTBo/A) sobre su sustrato específico SNAP-25 e incluye varias etapas: 1) obtención de SNAP-25 recombinante, 2) purificación de NTBo/A, 3) confrontación de la proteína recombinante con distintas concentraciones de la toxina y 4) observar los efectos por electroforesis/inmunoblot. Los resultados serán cotejados con los valores de toxicidad en el bioensayo de ratones.

Palabra claves: Botulismo, Neurotoxina botulínica, Diagnóstico

Botulism is a highly lethal neuroparalytic disease that affects humans and different animal species, caused by botulinum neurotoxins (BoNT). These BoNTs are mainly produced by Clostridium botulinum, whose strains can be identified by the serological neutralization bioassay, known as the ?Gold Standard? method (Poulain et al. 2008).Infant botulism (BL) is a toxic infection in children under 12 months of age and is possibly fatal. Its diagnosis presents difficulties due to the manifestation of non-specific symptoms and the wide spectrum in their severity. (Koepke et al, 2008). In Argentina, it is the pathophysiogenic form with the highest incidence. When BoNT reaches the myoneural plate, it binds irreversibly to specific receptors, inhibiting the release of the neurotransmitter, generating flaccid paralysis, which can cause death. (Schiavo G. et al. 1993). In addition, BoNT is used pharmacologically for the treatment of multiple pathologies.The BoNT fraction with toxic activity is internalized and acts by inhibiting the release of acetylcholine by proteolysis of the SNAP 25 fusion protein, inducing flaccid paralysis.BoNT/A is currently used for more than 20 different medical treatments (Dressler, 2012).Several methods are currently known to assess toxic activity, for diagnostic or therapeutic purposes. The mouse bioassay offers high efficiency, sensitivity and allows functionally active toxin to be detected at concentrations below 10 pg/mL, in contrast to other immunological methods. However, it has some disadvantages related to cost, ethical issues of research with live animals and the amount of time to perform the test. For this reason, we consider alternative methods to evaluate the proteolytic activity of the toxin.This project proposes an in vitro assay that could replace the bioassay with animals in the future. This is based on evaluating the activity of the toxin (BoNT/A) on its specific substrate SNAP-25 and includes several steps: 1) obtaining recombinant SNAP-25, 2) purification of BoNT/A, 3) confrontation of the protein recombinant with different concentrations of the toxin and 4) observe the effects by electrophoresis/immunoblot. The results will be collated with the toxicity values ​,​,in the mouse bioassay.

Keywords: Botulism, Botulinum neurotoxin, diagnosis

Los cánceres asociados a virus representan el 20 % de los tumores en humanos. Las infecciones ocasionadas por el herpesvirus asociado a sarcoma de Kaposi (KSHV) adquieren relevancia médica en el contexto de enfermos inmunodeprimidos como son aquellos pacientes que padecen SIDA, los cuales son más propensos a desarrollar sarcoma de Kaposi (KS). La incidencia de KS en paciente infectados con el virus de inmunodeficiencia humana (HIV) es de 1:20, alcanzando la cifra preocupante de 1:3 en poblaciones de transgenero que padecen de co-infecciones (HIV-HKSV). Las cifras de individuos afectados por KSHV (F. Huesped) y el limitado éxito de las terapias combinadas usando antiretrovirales y quimioterapia, sumado al avance a la resistencia adquirida hacia estas drogas, marca la necesidad de evaluar el problema. Por este motivo nos enfocamos en estudiar la capacidad de KSHV para modificar el perfil de azucares de glicoproteínas superficiales de la célula (glicoma) que favorecen una activación aberrante de las vías celulares que conducen a la transformación maligna de la célula infectada. En este contexto, evaluamos el papel de Galectina-1 como principal proteína reguladora de la inmunosupresión y oncogénesis inducida por KSHV en células madres mesenquimales (MSCs). Específicamente estudiamos si KSHV genera estructuras necesarias para la unión Gal1 liberada como consecuencia de la infección por KSHV, y capaz de activar el receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFRA) a través de la interacción con los N-glicanos presentes en el PDGFRA. Conocer los perfiles de glicosilación inducidos por la expresión de proteínas de KSHV y los mecanismos celulares que subyacen a ello, nos permitirá comprender mejor el proceso de transformación maligna que conduce a la generación de tumores asociados a infecciones virales, así como el diseño racional de posibles estrategias terapéuticas dirigidas a interrumpir la vía de señalización oncogénica inducida por KSHV e identificar biomarcadores en aquellos pacientes con tumores KS asociados a SIDA.

Palabra claves: CÁNCERES INDUCIDOS POR VIRUS, GLICOBIOLOGÍA, ANGIOGÉNESIS

Virus-associated cancers account for 20% of human tumors. Infections caused by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) acquire medical relevance in the context of immunosuppressed patients such as those with AIDS, who are more likely to develop Kaposi's sarcoma (KS). The incidence of KS in patients with the human immunodeficiency virus (HIV) is 1:20, reaching 1:3 in transgender populations coinfected HIV-HKSV. The number of individuals affected by KSHV (F. Host) and the limited success of combined therapies using antiretrovirals and chemotherapy, added to the progress of acquired resistance to these drugs, indicate the need to study the problem. For this reason, we have focused on studying the ability of KSHV to modify the sugar profile of cell surface glycoproteins (glycome) that favor an aberrant activation of cellular pathways, leading to malignant transformation of the infected cell. In this context, we propose to evaluate the role of Galectin-1 as the main protein regulator of KSHV-induced immunosuppression and oncogenesis in mesenchymal stem cells (MSC). Specifically, we will study whether KSHV generates structures necessary for Gal1 binding, released as consequence of KSHV infection, and able to activate the platelet-derived growth factor receptor (PDGFRA) through interaction with PDGFRA N-glycans. Knowing the glycosylation profiles induced by the expression of KSHV proteins and the underlying cellular mechanisms, will allow us to better understand the process of malignant transformation that leads to the generation of virally induced-tumors, as well as the rational design of possible therapeutic strategies aimed at interrupting the KSHV-induced oncogenic signaling pathway and identifying biomarkers in patients with AIDS-associated KS tumors.

Keywords: VIRAL-INDUCED CANCERS, GLYCOBIOLOGY, IMMUNOSUPPRESSION

El cáncer colorrectal (CCR) es una estirpe neoplásica maligna y muy frecuente que abarca distintas formaciones tumorales en el colon recto y ano. Se ubica como la tercera neoplasia maligna más frecuente, luego del cáncer de mama y pulmón a nivel mundial y nacional. Es una enfermedad heterogénea que surge de acumulaciones de alteraciones genéticas y epigenéticas que conducen al crecimiento de diferentes tipos de lesiones precursoras y luego en algunos casos, a la displasia y carcinogénesis. Estas marcas epigenéticas ocurren en etapas tempranas del desarrollo tumoral y permanecen en los carcinomas avanzados. En este sentido, las marcas epigenéticas surgen como potenciales biomarcadores de diagnóstico temprano o pronóstico. A partir de lo expuesto es que nos proponemos validar un panel de biomarcadores basados en metilación para implementar en el diagnóstico temprano de cáncer colorrectal. En primer lugar, constituiremos una cohorte de muestras de tejido tumoral y sano derivada de pacientes de riesgo medio con CCR. Para ello contamos con la aprobación del proyecto y su consentimiento informado por el Comité de Ética de la Facultad de Ciencias Médicas y del Hospital Español de Mendoza. Las muestras serán brindadas por el equipo de cirugía y coloproctología del Hospital italiano de Mendoza y Hospital Español de Mendoza. Nuestro equipo de trabajo cuenta con una plataforma bioinformática que nos permitió identificar un panel de biomarcadores epigenéticos. Estos marcadores serán identificados en el ADN de las muestras de tejido tumoral y sano extraído previamente, utilizando un sistema propio de detección por medio de qPCR. Los resultados obtenidos serán analizados estadísticamente en función de los hallazgos obtenidos y el estadio tumoral de cada paciente.

Palabra claves: Biomarcadores, Cancer, Colon

Colorectal cancer (CRC) is a common malignant neoplasm that encompasses different tumor formations that develop from the colon, rectum and anus. It´s the third most frequent cancer, after breast and lung cancer worldwide and nationally. It is a heterogeneous disease that arises from accumulations of genetic and epigenetic alterations that lead to different precursor lesions and then, in some cases, to dysplasia and carcinogenesis. These epigenetic marks appear early in tumor development, remain in advanced carcinomas and, in this regard, emerge as potential early diagnostic or prognostic biomarkers. In this context, we attempt to validate a panel of methylation-based biomarkers to implement in the early diagnosis of colorectal cancer. First, we will constitute a cohort of tumor and healthy tissue samples derived from medium-risk patients with CRC. The project and its informed consent have the approval of the UNCUYO School of Medicina and Hospital Español de Mendoza Ethics Committee. The samples will be provided by the Surgery and Coloproctology team of the Hospital Italiano of Mendoza and the Hospital Español of Mendoza. Our work team has a bioinformatics platform that allowed us to identify a panel of epigenetic biomarkers. These markers will be identified in the DNA of previously extracted tumor and healthy tissue samples via an own detection system by the use of qPCR. The results obtained will be statistically analyzed based on the findings obtained and the tumor stage of each patient.

Keywords: Biomarkers, Cancer, colon

El orujo de uva es el residuo que se obtiene luego del proceso de vinificación (principalmente formado por pieles y semillas), el cual contiene una alta cantidad de compuestos bioactivos como fibra dietética y polifenoles. Dentro de la fibra dietética, se destacan glicanos, celulosa y pectinas. Los polifenoles que predominan tanto en la uva como en el orujo son los flavonoides como catequina, epicatequina y quercetina, y compuestos no flavonoides como el resveratrol. El objetivo general será evaluar el efecto de la suplementación con orujo de uva en el perfil lipídico de pacientes con factores de riesgo cardiometabólico que concurran al Hospital Universitario. Objetivos específicos: 1) Evaluar el estado nutricional mediante peso, IMC y circunferencia de cintura en pacientes con factores de riesgo cardiometabólicos, 2) Evaluar el efecto del orujo de uva Malbec sobre los niveles plasmáticos de colesterol total, LDL-C, HDL-C y triglicéridos en pacientes con factores de riesgo cardiometabólicos, 3) Evaluar el efecto del orujo de uva Malbec sobre marcadores de inflamación en pacientes con factores de riesgo cardiometabólicos. Se plantea la hipótesis que la suplementación con orujo de uva Malbec repercute en el perfil lipídico de sujetos con factores de riesgo cardiometabólicos. Se llevará a cabo un estudio aleatorio, doble ciego, controlado con placebo en hombres y mujeres entre 18 a 69 años con un IMC > 25 kg/m2 y que presenten alguno de los siguientes criterios: glucemia en ayunas > 100 mg/dL y < 125 mg/dL, triglicéridos > 150 mg/dL, HDL-C mujeres <50 mg/dL, hombres < 40 mg/dL, LDL-C > 100 mg/dL, colesterol total > 200 mg/dL, presión arterial sistólica > 130 mmHg o diastólica > 85 mmHg, que concurran al Hospital Universitario. Los voluntarios que acepten ingresar al estudio serán asignados a consumir diariamente 10 gramos de orujo de uva en polvo que aportan 400 mg de compuestos fenólicos y 5 g de fibra dietética o placebo durante 6 semanas. Se les dará pautas de vida saludables relacionadas con la alimentación y el ejercicio físico. Se determinará el perfil lipídico al inicio del estudio y a las 6 semanas. Se realizarán mediciones antropométricas de peso, talla y circunferencia de cintura. Este estudio permitirá brindar información sobre el comportamiento de este ingrediente rico en fibra y polifenoles, lo cual resulta en una oportunidad para el desarrollo de nuevos alimentos funcionales.

Palabra claves: orujo de uva, perfil lipídico, fibra dietética

Grape pomace is the residue obtained after the vinification process (mainly formed by skins and seeds), which contains a high amount of bioactive compounds such as dietary fiber and polyphenols. Within dietary fiber, glycans, cellulose and pectins stand out. The polyphenols that predominate in both grapes and pomace are flavonoids such as catechin, epicatechin and quercetin, and non-flavonoid compounds such as resveratrol. The general objective will be to evaluate the effect of grape pomace supplementation on the lipid profile of patients with cardiometabolic risk factors who attend the University Hospital. Specific objectives: 1) Evaluate the nutritional status by weight, BMI and waist circumference in patients with cardiometabolic risk factors, 2) To evaluate the effect of Malbec grape pomace on plasma levels of total cholesterol, LDL-C, HDL-C and triglycerides in patients with cardiometabolic risk factors, 3) To evaluate the effect of Malbec grape pomace on markers of inflammation in patients with cardiometabolic risk factors. The hypothesis is raised that supplementation with Malbec grape pomace affects the lipid profile of subjects with cardiometabolic risk factors. A randomized, double-blind, placebo-controlled study will be conducted in men and women aged 18 to 69 years with a BMI > 25 kg/m2 and who meet any of the following criteria: fasting blood glucose > 100 mg/dL and < 125 mg/dL, triglycerides > 150 mg/dL, HDL-C women <50 mg/dL, men < 40 mg/dL, LDL-C > 100 mg/dL, total cholesterol > 200 mg/dL, systolic blood pressure > 130 mmHg or diastolic > 85 mmHg, who attend the University Hospital. Volunteers who agree to enter the study will be assigned to consume 10 grams of powdered grape pomace daily, which provides 400 mg of phenolic compounds and 5 g of dietary fiber, or placebo for 6 weeks. They will be given healthy life guidelines related to food and physical exercise. The lipid profile will be determined at the start of the study and at 6 weeks. Anthropometric measurements of weight, height and waist circumference will be made. This study will provide information on the behavior of this ingredient rich in fiber and polyphenols, which results in an opportunity for the development of new functional foods.

Keywords: grape pomace, lipid profile, dietary fiber

La leishmaniasis es una zoonosis parasitaria en expansión en nuestro continente y es considerada por la Organización Mundial de la Salud como una de las enfermedades olvidadas (neglected diseases) por afectar principalmente a las poblaciones más pobres y con un limitado acceso a los servicios de salud. Esta parasitosis se encuentra distribuida en 98 países, afecta 12 millones de personas en el mundo con 2.000.000 de nuevos casos cada año.En Argentina, el área endémica de la leishmaniasis corresponde a las provincias de Salta, Jujuy, Tucumán, Catamarca, Santiago del Estero, Chaco, Formosa, Misiones y Corrientes encontrándose el insecto vector sin infección en Santa Fe, Entre Ríos. Leishmania amazonensis es uno de los agentes etiológicos de la leishmaniasis tegumentaria americana en nuestro país. Hasta el momento no se cuenta con una vacuna para la prevención de la leishmaniasis en humanos y el tratamiento farmacológico de primera línea, el antimoniato de meglumina (glucantime), no es producido ni comercializado en nuestro país y se ha reportado que su uso prolongado genera resistencia en clones de Leishmania. Además, el tratamiento con glucantime trae aparejados diversos inconvenientes: la agresividad que conlleva su administración y efectos secundarios con alteraciones hepáticas, pancreáticas y renales. El objetivo general del proyecto es el desarrollo de nuevas estrategias para el tratamiento de la leishmaniasis, basado en vacunas terapéuticas. Por lo tanto como estrategia de inmunoterapia se evaluará la acción terapéutica de una vacuna de primera generación adyuvantizada con un agonista de TLR-3 en un modelo in vivo de leishmaniasis cutánea. Cada protocolo experimental contará con un grupo tratado con glucantime, que será empleado como tratamiento gold standard. El efecto terapéutico de la vacuna experiemtal se evaluará mediante el análisis de la progresión de la infección, recuento parasitario, índice esplénico, respuesta inmune e histopatología.

Palabra claves: Leishmaniasis, Inmunoterapia, Balb/c

Leishmaniasis is a parasitic zoonosis that is expanding in our continent and is considered by the World Health Organization as one of the neglected diseases because it mainly affects the poorest populations and those with limited access to health services. This parasitosis is distributed in 98 countries, affects 12 million people in the world with 2,000,000 new cases each year.In Argentina, the endemic area of ​,​,leishmaniasis corresponds to the provinces of Salta, Jujuy, Tucumán, Catamarca, Santiago del Estero, Chaco, Formosa, Misiones and Corrientes, with the vector insect being found without infection in Santa Fe, Entre Ríos. Leishmania amazonensis is one of the etiological agents of American tegumentary leishmaniasis in our country.So far there is no vaccine for the prevention of leishmaniasis in humans and the first-line pharmacological treatment, meglumine antimoniate (glucantime), is not produced or marketed in our country and it has been reported that its prolonged use generates resistance in Leishmania clones. In addition, treatment with glucantime brings with it several drawbacks: the aggressiveness that its administration entails and side effects with liver, pancreatic and renal alterations.The general objective of the project is the development of new strategies for the treatment of leishmaniasis, based on therapeutic vaccines. Therefore, as an immunotherapy strategy, the therapeutic action of a first-generation vaccine adjuvanted with a TLR-3 agonist will be evaluated in an in vivo model of cutaneous leishmaniasis. Each experimental protocol will have a group treated with glucantime, which will be used as the gold standard treatment. The therapeutic effect of the experimental vaccine will be evaluated by analyzing the progression of the infection, parasite count, splenic index, immune response and histopathology.

Keywords: Leishmaniasis, Immunotherapy, Balb/c

La biología del gasterópodo invasivo Pomacea canaliculata ha recibido mucha atención en las últimas décadas por su impacto negativo en la agricultura de cultivos. La fisiología digestiva permanece incompleta, particularmente la degradación enzimática de macromoléculas como proteínas y lípidos. El estudio las enzimas digestivas permitirá comprender la capacidad de estos animales voraces para digerir diferentes tipos de alimentos, lo que les confiere su ventaja competitiva y tener éxito en diversos entornos (incluso ecosistemas agrícolas). Aquí, se utilizará una espectrometría de masas en tándem (enfoque proteómico) para identificar y cuantificar peptidasas y lipasas a lo largo del tracto digestivo de P. canaliculata. Específicamente se busca describir el conjunto de enzimas digestivas sintetizadas en la glándula salival, digestiva y el intestino contorneado de este gasterópodo, así como aquellas enzimas potencialmente originadas en los microrganismos simbióticos del tracto digestivo. Este objetivo se desarrollará a través de una combinación de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) y de proteómica cuantitativa utilizando espectrometría de masas con monitorización de reacciones múltiples (MRM-MS).

Palabra claves: AMPULÁRIDOS, FISIOLOGÍA DIGESTIVA, OMICS

The biology of the invasive gastropod Pomacea canaliculata has received much attention in the last decades for its negative impact on crops agriculture. The digestive physiology remains incomplete, particularly the enzymatic breakdown of macromolecules such as proteins and lipids. Digestive enzymes would strengthen the understanding of the snails? ability to digest different food types, which confers their competitive advantage to succeed in diverse environments (even agricultural ecosystems). Here, a tandem mass spectrometry was used to identify and quantify peptidases and lipases along the digestive tract of P. canaliculata. Specifically, we seek to describe the set of digestive enzymes (and their families of proteins) synthesized in the salivary and digestive glands and the coiled gut of this gastropod, as well as those enzymes possibly originating from the symbiotic microorganisms of the digestive tract. This objective will be developed through a combination of liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and quantitative proteomics using multiple reaction monitoring mass spectrometry (MRM-MS).

Keywords: AMPULLARIIDS, DIGESTIVE PHYSIOLOGY, OMICS